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食用油中苯并(a)芘(BaP)ELISA检测试剂盒使用说明书
检测限:1.5μg/kg 定量区间:2-20μg/kg
本产品可以采用单点定标,即点1个标准品实现定量分析,最大可实现47个样本的检测。采用单点定标时,数据分析请来电索取专门的Excel数据分析软件
1. 样本前处理(动植物性食用油脂,如菜籽油、大豆油、花生油、玉米油、调和油等)
需要但未提供的试剂和器皿如下: |
(1) 二氯甲烷,分析纯 |
(2) 正己烷,分析纯 |
(3) 甲醇,分析纯 |
(4) 去离子水 |
(5) 5mL圆底或锥底玻璃离心管 |
(6) 2ml玻璃进样瓶或者5ml圆底玻璃试管(一次性) |
(7) 5mL有机玻璃离心管架(24孔),1个 |
(8) 17*17*10cm瓷盘,1个 |
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试剂配制 |
预处理试剂:取1管试剂A,加入到1瓶试剂B中,剧烈震荡使其完全溶解,备用【配制好的预处理试剂呈白色半透明状,于2-8℃保存有效期10天】 |
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1.1预处理 |
1)称取0.4±0.005g油样于5mL玻璃离心管中,加入0.4mL 预处理试剂混匀; |
2)室温静置5min(离心管斜躺在桌面上) |
3)加入0.4mL去离子水、1mL正己烷剧烈振荡2min;静置分层约1min(此时可以先活化柱子) |
1.2过SPE柱 |
1)活化:依次采用1mL二氯甲烷、1mL正己烷过柱 |
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3)淋洗:依次用1mL正己烷、1mL试剂C淋洗,最后吹空气3s; |
4)解吸:加入1mL二氯甲烷解吸(流速1mL/min),收集全部解吸液于2mL玻璃进样瓶中 |
5)浓缩及复溶:40℃水浴氮吹干;加入1mL甲醇涡旋15s;取0.1mL甲醇复溶液,再加入 |
0.1mL样本稀释液涡旋15s |
2. 操作步骤
实验前,请将检测试剂盒从2-8℃冰箱中取出,于室内温度20-28℃下平衡1小时! |
1)取出平衡后的适量板条,其余放回铝膜袋中; |
2)依次:加50μL标准品/样本于相应微孔中;加50μL酶结合物和50μL抗体至所有微孔; |
3)盖上板贴,于20-28℃下,孵育20分钟;倒出微孔中液体; |
4)将洗涤液注满微孔浸泡15s倒出,重复2次; |
5)加100μL底物至微孔中,于20-28℃下,孵育10分钟; |
6)加100μL终止液至微孔中,于450/630nm波长下,读数 |
3. 结果分析
1)结合率计算公式 |
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其中, B:为i样本或浓度点的结合率; |
Ai:为i样本或浓度点的吸光度; |
A0:为零标准孔的吸光度; |
2)建立标准曲线:以标准品浓度的对数为x轴,以其对应的结合率B的logit值为y轴,进行线性拟合 |
建立标准曲线。将样本结合率(计算见1)中公式)代入曲线方程,即可求出样本中苯并(α)芘的含量。 |
3)超出检测上限的样本稀释方法 |
① 将样本前处理步骤“1.2过SPE柱-5)”中0.1mL甲醇复溶液用无水甲醇稀释5倍; |
② 将①的溶液,参照说明书采用样稀稀释后点样; |
③ 将得出的含量再乘以5,即为最终样本中苯并(α)芘的含量; |