现货口蹄疫A型抗体（FMDV）检测试剂盒（ELISA）促销中

仅供科研使用，不得用于临床检验。

口蹄疫A型抗体（FMDV）检测试剂盒（ELISA）

说明书

货号：INS0020007

    使用前，请务必仔细阅读说明书，如有不清楚的，请拨打24h技术支持专线：0714-6338558或18171667592/18108699172，咨询清楚再进行实验。

黄石市艾恩斯生物科技有限公司

电话：0714-6338558

【产品名称】

通用名称：口蹄疫A型抗体检测试剂盒（ELISA）

英文名称：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）

【包装规格】

48T/盒，96T/盒

【预期用途】

本试剂用于检测血清中口蹄疫A型抗体，可用于免疫效果评价、辅助诊断等

【检验原理】

  本试剂盒系由预包被口蹄疫A型抗体抗原的酶标板（固相抗原，货号：INS0020007C）、抗体工作液（货号：INS0020007J）、酶标记物（酶标抗体，货号：INS0020007E）及其他配套试剂组成，应用竞争酶联免疫法原理检测禽血清或血浆中口蹄疫A型抗体。实验时在酶标板中加入稀释的待检血清和抗体工作液，若样品中含有口蹄疫A型抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫A型抗体。

【主要组成成分】

主要成分

阴阳性对照已经通过测试，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

  2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

  3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为28天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

  半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】

  样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

2、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

3、蛋黄：取2ml新鲜蛋黄加2ml生理盐水震荡混匀，3000转/分钟离心15分钟，取上清作为样本。

4、用工作洗涤液将待检血清、血浆或已处理蛋黄样本按5倍稀释（如10μl样本加入40μl工作洗涤液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

试剂准备

1、使用前，所有的组分都要至少复温2h，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。

3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

操作程序

1、所有试剂和组分都先恢复到室温，阴性/阳性对照和样品，建议做复孔。

2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。

3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

4、设置阴阳性对照孔、样本孔，阴阳性对照孔各加对照品50μL，样本孔加样本50μL。

5、每孔加抗体工作液50μl，混匀，置37℃反应30分钟。

6、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

7、所有孔加入辣根过氧化物酶标记物100μL。

8、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

   10、每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】

实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥0.98，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×55%。

【检验结果的解释】

1.PI=（1-样本值/阴性对照孔均值）×100；

2.PI≥50为阳性；PI＜50为阴性。

【检验方法的局限性】

1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。

2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。

3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。

7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

【产品性能指标】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。

2、阴性结果

阴性对照的OD值高于0.98。

3、阳性结果

阳性对照的OD值低于阴性对照的OD值的55%。

4、特异性

本试剂盒识别天然和重组口蹄疫A型抗体，与结构类似物无交叉。

5、稳定性

    2℃-8℃保存，有效期6个月。

【注意事项】

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。

技术提示

1、混合蛋白溶液时，避免起泡。

2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。

3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。

6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理

  所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。

【基本信息】

  企业名称：黄石市艾恩斯生物科技有限公司

  生产地址：湖北省黄石市黄石港区磁湖路41号

  固定电话：0714-6338558

  邮    箱：postmaster@inselisa.com